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羧酸酯酶（CarE）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

測(cè)定原理：羧酸酯酶能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固藍(lán)顯色，在450nm檢測(cè)光吸收速率來(lái)監(jiān)測(cè)萘酯，生成速率，從而計(jì)算CarE活性。
羧酸酯酶是一種多聚蛋白，主要催化酯、硫酸酯和酰胺的水解。
carboxylesterase
羧酸酯酶主要位于肝、其他組織及細(xì)胞胞液、線(xiàn)粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。
測(cè)定意義：哺乳動(dòng)物CarE,也稱(chēng)脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類(lèi)似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),有機(jī)磷可結(jié)合并且抑制CarE活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置：試劑一:液體×1瓶,4℃保存
                                試劑一:液體×1瓶,4℃保存
測(cè)定步驟：1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450 nm,蒸餾水調(diào)零。
                    2、試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
                    3、空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入5μL蒸餾水和1000μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為                   A2。△A空白管=A2-A1
                  4、測(cè)定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入5μL上清液和1000μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4。△A測(cè)定管=A4-A3
注意：空白管只需測(cè)定一次。

羧酸酯酶（CarE）實(shí)驗(yàn)代測(cè)