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丙酮酸激酶（Pyruvatekinase，PK）試劑盒
一、 測(cè)定意義
丙酮酸激酶酶催化糖酵解過(guò)程中的zui后一步反應(yīng)，是糖酵解過(guò)程中的主要限速酶之一，也是動(dòng)植物組織中產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一，因此測(cè)定動(dòng)植物組織中PK的活性具有重要意義。
二、 測(cè)定原理
在二磷酸腺昔（ADP）存在的條件下丙酮酸激酶能夠催化磷酸烯醇丙酮酸（PEP）轉(zhuǎn)化成丙酮酸，丙酮酸與2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在堿性溶液中顯棕 紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比，由此計(jì)算丙酮酸激酶活力。三、試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備 可見分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、37℃恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿或酶標(biāo)板、蒸餾水
四、試劑的組成和配制
試劑一：粉劑×1瓶，常溫保存，用時(shí)加入50mL雙蒸水溶解，4℃保存3個(gè)月；試劑二：液體13 mL×1瓶，4℃保存3個(gè)月； 試劑三：粉劑×1支，常溫保存；用時(shí)加1mL雙蒸水充分溶解;試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；用時(shí)加1.2 mL雙蒸水充分溶解；試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；用時(shí)加550μL雙蒸水充分溶解；試劑六：2 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液母液1mL，-20℃保存1個(gè)月；試劑七：儲(chǔ)備液15 mL，4℃避光保存3個(gè)月； 試劑八：終止試劑50 mL，4℃保存3 個(gè)月；
五、粗酶液的提取
準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量體積比（g/mL）加9 倍試劑一，制成10%勻漿。8000g/min 離心10 min，取上清液待測(cè)，同時(shí)測(cè)定組織蛋白含量。

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